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医学生物学与医学细胞生物学实验教程(第3版)
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医学生物学与医学细胞生物学实验教程(第3版)

作者：杨春蕾，蔡晓明
出版社：科学出版社出版时间：2022-08-01
开本： B5 页数： 136
本类榜单：医学销量榜
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医学生物学与医学细胞生物学实验教程(第3版) 版权信息

医学生物学与医学细胞生物学实验教程(第3版) 内容简介

本书是"十二五"普通高等教育本科重量规划教材《医学细胞生物学》（第八版）和《医学生物学》（第九版）的配套教材。全书共安排24个实验内容，既有巩固和强化基础知识、基本理论和基本技能训练的实验，也有培养学生动手能力、科研思维能力的综合性、探索性及创新性实验。力求全面提升医学类学生的生物学基本实验技能。

医学生物学与医学细胞生物学实验教程(第3版) 目录

目录
第三版前言
**版前言
实验规则
实验一　光学显微镜的构造及使用方法　1
实验二　光学显微镜下的细胞形态结构观察　10
实验三　核酸成分的检测　16
实验四　细胞器及细胞骨架标本的制备与观察　19
实验五　小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动观察　24
实验六　细胞膜通透性的观察　27
实验七　细胞核的分离与鉴定　30
实验八　细胞有丝分裂标本的制备与观察　32
实验九　细胞减数分裂标本的制备与观察　36
实验十　小鼠骨髓细胞染色体标本的制备与观察　41
实验十一　人外周血淋巴细胞染色体标本的制备与观察　44
实验十二　染色体G显带及SCE标本的制备与观察　48
实验十三　人体细胞染色体G显带核型分析　52
实验十四　动物细胞的原代培养　58
实验十五　培养细胞的传代及冻存复苏　63
实验十六　培养细胞的活力测定　68
实验十七　动物细胞融合　71
实验十八　染色体提前凝聚的诱导与观察　74
实验十九　流式细胞术　78
实验二十　细胞凋亡的诱导与检测　84
实验二十一　人类性染色质检测及几种遗传性状的分析　90
实验二十二　肿瘤细胞特异性骨架蛋白的显示　95
实验二十三　细胞衰老的诱导及β-半乳糖苷酶的检测　98
实验二十四　人类遗传病家系分析　102
实验二十五　家兔解剖　106
附图
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医学生物学与医学细胞生物学实验教程(第3版) 节选

实验一 　　光学显微镜的构造及使用方法 　　实验目的 　　1.掌握光学显微镜的基本结构和功能。 　　2.熟悉光学显微镜的正确使用方法。 　　3.了解光学显微镜的维护方法。 　　实验用品 　　一、器材 　　普通光学显微镜、特殊光学显微镜、擦镜纸。 　　二、材料 　　家兔肌肉、肝脏、肾脏或蛙鱗状上皮等切片标本。 　　显微镜类型 　　一、光学显微镜 　　（一）普通光学显微镜 　　普通光学显微镜（ordinary light microscope，OLM)是目前应用*广泛的显微镜，分辨率可达0.2pm，放大倍数多为500～1000倍。常用于观察肉眼不能分辨的细微结构，如细胞的一般形态结构，可看到细胞核、核仁、线粒体、中心体、高尔基复合体及染色体等结构。 　　（二)暗视野显微镜 　　暗视野显微镜（dark field microscope)是在普通光学显微镜的基础上改造而来，使用中央遮光板或暗视野集光器，使照明光线不能直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进人物镜，故视野背景是暗的，物体边缘是亮的。暗视野显微镜能观察到4～200nm的微小粒子，一般用于观察微小生物的运动、活细胞的结构及细胞内微粒的运动等。 　　（三）倒置显微镜 　　倒置显微镜（inverted microscope)的物镜位于标本下方，光源位于标本上方。该种显微镜主要用于观察培养细胞等活体标本。 　　（四）相差显微镜 　　相差显微镜（phase contrast microscope)是利用光的衍射和干涉原理，在光学系统中有一套特殊装置（如环状光圈和相板的物镜等），能调整直射光或衍射光的相位，使观察标本的各部分明暗反差增大，把人类肉眼看不到的相差变为明暗的振幅差，以利于观察活体标本或未染色的细微结构。 　　（五）荧光显微镜 　　荧光显微镜（fluorescence microscope)是由荧光光源、荧光镜组件、滤板系统、光学系统等部件组成。它利用高发光效率的点光源，经过滤色系统发出一定波长的光作为激发光，激发检测标本内的荧光物质，通过物镜和目镜放大以观察标本的荧光图像。细胞内含有少量维生素、核黄素等天然荧光物质，同时也可以将细胞中的某些成分与酸性品红、甲基绿、吖啶橙等荧光物质结合，以便观察分析物质在细胞内的分布位置、细胞的结构及功能等。 　　（六）激光扫描共聚焦显微镜 　　激光扫描共聚焦显微镜（confocal laser scanning microscope，CLSM)是利用激光束经照明针孔形成点光源对标本内焦平面的每一点进行扫描，标本上的被照射点在探测针孔处成像，并迅速在计算机监视器屏幕上形成荧光图像。同时，在显微镜载物台上有微量步进马达，根据需要可使载物台（标本）步进移动，因此标本的各个横断面图像均能清晰地显示，通过计算机图像信息处理可对标本三维重建，在亚细胞水平可观察生理信号及细胞形态变化。激光扫描共聚焦显微镜可用于观察活体胚胎，大脑皮层内微循环，细胞内的网络结构如内膜系统、细胞骨架及原位染色体等。 　　（七）摄影显微镜 　　摄影显微镜（video microscope)又叫智能显微镜，它是将普通光学显微镜与彩色高分辨摄像头、高保真录像机及彩色监视器结合制成，使显微镜视野中所观察的标本细微结构真实、有效地记录下来，便于分析标本的动态变化过程。若配上彩色高分辨数码相机、高清晰度彩色打印机，就可在观察标本的同时得到高清晰度图片。 　　二、电子显微镜 　　电子显微镜是一类根据电子光学原理，用电子束和电磁透镜代替光束和光学透镜，观察物质的超微结构乃至原子图像的仪器。1931年，德国科学家克诺尔和卢斯卡发明了**台电子显微镜（electron microscope)。1939年，西门子公司制造出分辨率达3nm的世界上*早的实用电子显微镜。电子显微镜经过改进和发展，已成为生命科学、物理、化学和材料科学等领域的重要研究工具。目前*常用的是透射电子显微镜和扫描电子显微镜。 　　（一）透射电子显微镜 　　透射电子显微镜（transmission electron microscope，TEM)的光路与普通光学显微镜相仿，可以看到在光学显微镜下无法看清的小于0.2nm的细微结构，放大倍数可从几十倍连续变化到几十万倍。透射电子显微镜是由电子枪发射的高速电子束经高压加速和聚光透镜的聚焦，然后穿过样品再经过多级电磁透镜（物镜、中间镜、投影镜）放大，*后将高度放大的图像显示在荧光屏上或记录在照相装置中。透射电子显微镜样品的制作较为关键，包括取材、固定、脱水、浸透、包埋聚合、超薄切片（一般厚度为50～80nm)、染色等步骤。 　　（二）扫描电子显微镜 　　扫描电子显微镜（scanning electron microscope，SEM)也是利用高能电子束充当光源的大型显微分析设备。扫描电子显微镜的高速电子束并不穿过样品，仅作用于样品表面，在样品表面进行逐点逐行的光栅扫描。扫描电子显微镜配有电子信息检测器，可检测样品表面被电子探针激发的不同电子信号，在获取到样品表面结构形貌特征或化学组成信息后，经信号放大，呈现在显像屏上。 　　扫描电子显微镜由电子光学系统、信号接收转换系统、图像显示记录系统组成。其样品制备包括材料的表面清洁、固定、脱水、干燥、导电处理等步骤。因扫描电子显微镜注重样品表面形貌观察，具有很强的立体感和三维效果。 　　普通光学显微镜的基本结构和功能 　　普通光学显微镜是*常用的一种光学显微仪器，在医学教学、科研及临床工作中使用的普通光学显微镜有直立式和倾斜式（图1-1)两类，均由机械部分、照明部分及光学部分组成。 　　一、机械部分 　　（一）镜座 　　镜座位于显微镜的*下方，是显微镜的基座，起支持和稳定镜体的作用。 　　（—)镜柱 　　镜柱是与镜座和镜臂相连的垂直结构，其上装有调焦装置。 　　（三）调焦装置 　　调焦装置位于镜柱上，呈同心圆式排列，包括粗调焦旋钮和细调焦旋钮。调焦装置的功能是调节焦距，粗调焦旋钮可使镜台较快速度地升降，旋转一圈可使载物台升降10mm，适用于低倍镜调焦；细调焦旋钮可使镜台缓慢升降，旋转一圈可使载物台升降0.1mm，用作较精细的调节，适用于高倍镜、油镜和分辨物像清晰度调焦。 　　（四）镜臂 　　镜臂支撑镜筒和载物台，是手握提显微镜的结构，位于镜柱上方，略呈弓形。 　　（五）镜筒 　　镜筒是位于镜臂上方的圆筒，上端安装目镜，下端连接物镜转换器。光镜镜筒分单筒式（可分直立式和倾斜式）和双筒式两种，目前多为倾斜式双筒式镜筒。国际上显微镜标准镜筒长度为160mm。 　　（六）物镜转换器 　　物镜转换器装在镜筒下方，呈圆盘状，有3～4个物镜螺旋口，可安装不同放大倍数的物镜。物镜应按放大倍数高低顺序依次排列，旋转物镜转换器时，不应用手指推动物镜，因为长时间推动物镜容易使光轴歪斜，影响成像质量。 　　（七）载物台 　　载物台是位于镜臂前方的方形或圆形平台，用以放置玻片标本。方形载物台面积一般为120mm×110mm，中央有一通光孔，载物台上装有标本夹和推片器，既可固定标本又可前后左右移动，推片器上有纵横游标尺，可利用游标尺上的刻度作为标记，以便寻找物像，也可用于测量标本的大小。 　　二、照明部分 　　显微镜的照明装置由光源、反光镜、聚光器和光圈等部分组成。 　　（一）光源 　　显微镜有自带光源和不带光源两种。前者采用电光源照明，电光源灯一般装在镜座内或镜座后的灯壳中，可以使用镜座侧面的调光旋钮调节光源强度；后者采用自然光源或人工外光源照明。 　　（—)反光镜 　　反光镜（mirror)装在镜座上，可向各个方向转动，是一个可随意转动的双面镜，把光线反射入聚光镜。反光镜的一面是平面镜，另一面是凹面镜。平面镜具有反射光线能力，一般在较强光线时使用。凹面镜既有反光作用也有聚光能力，适用于较弱光和散射光。内置光源的光学显微镜不需要反光镜。 　　（三）聚光器 　　聚光器位于通光孔下方的聚光器支架上，由一组透镜组成，可使反光镜反射的光线或内置光源发出来的光线集中于标本上，起汇聚光线的作用。在镜柱的左侧面有一聚光器升降螺旋，可使聚光器升降。聚光器上升时光线增强，下降时光线减弱。一般聚光镜的焦点在其上方1.25mm处。 　　（四）光圈 　　光圈（diaphragm)又叫可变光阑，位于聚光器下方，由十几张金属薄片组成，中心部分形成圆孔，可调节光强度，使聚光镜的数值孔径与物镜的数值孔径相适应。侧面有一光阑小柄，拨动小柄可使光圈扩大或缩小，以调节进光量。 　　三、光学部分 　　（一）目镜 　　目镜（ocular)安装在镜筒的上端，由上下两组透镜组成。目镜上刻有5×、10×、40×等符号，表示其放大倍数。有的目镜筒内安置有一指针，用于指示视野中观察物像的部位，以利示教和提问。 　　（二）物镜 　　物镜（objective)装在物镜转换器下方，是决定显微镜性能的重要部件，根据物镜与被检标本之间的介质不同可分为干燥物镜、浸液物镜，依放大倍数不同分为低倍镜、高倍镜和油镜。低倍镜短，数值孔径一般为0.25，放大倍数一般为10×;高倍镜较长，数值孔径一般为0.65，放大倍数为40×、45X或60×;油镜*长，数值孔径一般为1.25，放大倍数为100X。通常在物镜上刻有相应的标记，如在10倍的物镜上刻有10/0.25和160/0.17。10表示物镜放大倍数，0.25表示镜口率，160表示镜筒长度，0.17表示盖玻片厚度，两者的单位均为毫米。 　　镜口率又称数值孔径（numerical aperture，NA)，可反映物镜分辨力的大小，数字越大表示分辨力越高，一般10X物镜的NA为0.25，40X物镜的NA为0.65，100X物镜的NA为1.25（NA＝n sinθ，其中n为介质的折射率，sinθ为透镜视锥半顶角的正弦值)。 　　显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积。如目镜10×、物镜100×，则放大倍数为10×100=1000倍。 　　光学显微镜的使用方法 　　在使用显微镜时，应右手握镜臂左手托镜座，从镜盒中取出显微镜轻放在自己座位左前方的实验台上，距离实验台边缘6～10cm处为宜。直立式显微镜可使用倾斜关节，让镜筒略向自己倾斜（不能超过45°)以便观察。 　　一、低倍镜的使用 　　（一）对光 　　先转动粗调焦旋钮使镜筒升高，再旋转物镜转换器使低倍镜对准通光孔（可听到轻微的咔哒声)。然后打开光圈，上升聚光器，双眼睁开，左眼对准目镜观察，双手并用，左手调焦，右手移片或绘图。转动反光镜，直到视野内光线明亮均匀。

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