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发育生物学实验
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发育生物学实验

作者：林丹军
出版社：科学出版社出版时间：2021-12-01
开本： B5 页数： 176
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发育生物学实验 版权信息

  • ISBN：9787030315724
  • 条形码：9787030315724 ; 978-7-03-031572-4
  • 装帧：一般胶版纸
  • 册数：暂无
  • 重量：暂无
  • 所属分类：
    自然科学
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发育生物学实验 内容简介

本书共20个实验，包括精子和卵子的发生，受精的细胞学观察，动物的早期发育，蛙的器官发生，鸡的原生殖细胞，蛙的人工催产及早期发育观察，无尾两栖类的单性生殖，鸡卵的人工孵育和早期发育观察，鸡胚肢芽的尿囊绒毛膜移植，鸡胚的壳外培养，蛙胚胎细胞的分离和再聚集，胚胎诱导，小鼠早期胚胎发育和胚胎移植，细胞核移植，胚芽的连续切片制作技术，用免疫组织化学方法分析胚胎发育中的基因表达，用核酸原位杂交技术分析胚胎发育中的基因表达，小鼠胚胎干细胞的体外培养。

发育生物学实验 目录

目录
前言
卷首语:实验的教与学 1
实验一 精子的发生 4
实验二 卵子的发生 10
实验三 受精的细胞学观察 17
实验四 动物早期发育:卵裂及囊胚类型 24
实验五 动物早期发育:原肠形成和原肠胚类型 31
实验六 蛙的器官发生 39
实验七 鸡的原生殖细胞 49
实验八 蛙的人工催产及早期发育观察 55
实验九 无尾两栖类单性生殖 65
实验十 鸡卵的人工孵育和胚胎发育观察 73
实验十一 鸡胚肢芽的尿囊绒毛膜移植 82
实验十二 鸡胚的壳外培养 87
实验十三 蛙胚胎细胞的分离和再聚集 92
实验十四 胚胎诱导 96
实验十五 小鼠早期胚胎发育和胚胎移植 102
实验十六 细胞核移植 114
实验十七 胚胎的连续切片制作技术 122
实验十八 用免疫组织化学方法分析胚胎发育中的基因表达 129
实验十九 用核酸原位杂交技术分析胚胎发育中的基因表达 135
实验二十 小鼠胚胎干细胞的体外培养 144
附录一 常用试剂的配制 152
附录二 实验中常用的自制工具 157
附录三 常用器皿和玻片的处理 159
附录四 小鼠sonichedgehog (shh)基因RNA探针的制备与标记 160
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发育生物学实验 节选

卷首语：实验的教与学 今天，我们能够对一般动物的发育过程和发育机制有所认识，是基于上百年来一代又一代的胚胎学家和发育生物学家对动物发育进行无数次观察和实验所获得的研究成果。早期，研究者只是简单地观察单细胞的受精卵如何通过奇妙的转变而成为复杂的个体，并且具有成千上万不同类型的细胞。后来，通过研究者精细的观察，我们懂得了在动物发育过程中出现了细胞分裂、细胞运动、细胞特化等变化。随之，问题也就提出来了，我们想知道在发育中这些事件是如何发生的。这是一个极具挑战性的问题。为了揭开发育之谜，研究者开始深入探索动物的发育机制：探究胚胎发育过程中胚胎对营养、离子代谢等的诸多需求，发育中的各种事件是如何发生的；发育这些事件是否在胚胎的一个地方或多个地方发生；胚胎附近细胞或组织对这些事件的发生是否有重要影响；这些发育中所发生的变化是否可逆，基因是如何控制这些变化的；在发育过程中，基因组有否变化 近年来，由于各学科的相互渗透，研究生物化学、分子生物学等新技术、新仪器的应用，使人们对过去观察过的发育事件，又重新用遗传学、分子生物学的观点进行解析。例如，在发育过程中相同的基因组如何通过差异的表达，产生不同的细胞类型；RNA 的加工、蛋白质的合成如何对发育进行调节，等等。 在这门实验课程中，有关发育的很多观点都体现在各个实验内容中，包括实验原理、实验过程和结果。通过实验你可以学习如何做每个实验，分析每次实验结果，并理解每个结论的意义。然而，实验不仅仅只有结果，更重要的是可以经历结果产生的过程。这个过程不是仅仅通过阅读教科书或科学杂志就能够获得的。在实验中使用活的实验材料，这使得每次实验都更具有挑战性。使用活的实验材料能使你有机会置身于真正的研究中。实验中可能会出现教材中未提及的现象和结果，因为活的胚胎对环境因素的改变是十分敏感的。当你开始发育生物学的探索时，*重要的是带有一颗好奇的心，问问题、提假想，然后在实验中仔细操作、认真观察，才能获得令人满意的结果。如果没有付出辛勤的劳动，实验就有可能失败。因此，一开始就要告诉学生，搞研究并不像我们看到的已发表文章中所呈现的结果那么圆满。在发表的文章中不会把错误、失败或获得成果的辛劳告诉大家。研究工作中错误和失败随时都可能发生，学生应准备面对挫折。实验前要认真阅读教材和相关资料，对实验内容、目的要求、操作顺序及要领做到心中有数。应该非常认真地去做实验。如果你的实验结果不完善，或实验的具体过程出现的错误等，也要如实记录。科研工作者和学生通常都有压力，科研人员总想迅速得到理想的结果，学生总想在有限的时间里取得好的成绩，这样都有可能产生去造假的念头。所以，对于科学研究者来讲，实验态度严肃认真，实事求是，写出可靠的结果和真实的实验报告是很重要的。 每个学生都要有自己的实验记录本，所有的实验过程和观察都要完整地当场记录下来，切不可过后补写，即使非常小的细节，有时对你也是重要的。在将来分析实验结果时，这些记录是你完成实验报告的原始记录和依据。此外，还应准备绘图纸张和铅笔等，随时在显微镜下记录和绘出动物发育的形态特点和变化。 撰写实验报告是完成每个实验后必须做的功课或作业。实验报告的格式多样，可以根据实验内容的复杂性进行设计。有些探索性实验*好以正式发表论文的格式进行写作，这对初次进行科学探索的学生而言也是一个很好的科学训练。实验报告应包括这几方面的内容。 (1)前言(intrduction)：简单描述实验的目的与目标，前人在该领域的研究成果和进展，所要进行实验的实验原理、理论根据，提出的假设或设想等。若需要引用他人文献，请注明出处。 (2)材料与方法(materialandmethod)：写出你自己的实验步骤，完整记录实验操作流程与实验条件。虽然在实验教材中对每个实验都有详细的描述、具体的实验步骤，而且实验室为每个实验提供了仪器和试剂，但在具体操作时一些实验条件的变化，如实验材料状况、实验时的温度、pH 及其他因素都有可能对实验结果造成影响。 (3)结果(result)：条理清晰地写出你的实验结果，真实地陈述观察所得结果。实验数据要经过整理后做成图、表以利于解读。发育观察可通过绘图或拍摄图像加以注释。若重复尝试过多次的实验，可去芜存菁，只写出有意义的实验结果。 (4)讨论(discussion)：对实验结果作进一步的整合与分析，说明由结果中所获得的信息。若有与事实或已知不符的现象，请仔细讨论或解释。此部分内容*需要发挥你的专业实力。 (5)参考文献(reference)：报告中若引用他人结果，一定要列入参考文献。编辑参考文献要多下苦功，参考文献的写法相当复杂，不同期刊有不同格式，请选定一种格式。 各个实验项目可以根据实验室的实际条件灵活安排，但在课程开始前要仔细计划和安排日程。实验中所使用的活材料，如海胆、蛙、鱼在一年中只有生殖季节(4~6月)才可获得胚胎。虽然鸡胚生殖不受季节限制，但是秋、冬季的活力不如春季。因此，建议实验课程*好安排在春季。有的实验室有条件人工饲养爪蟾(Xenopuslaevis)和斑马鱼(Daniorerio)，可在人工控制下随时获得活胚胎。 一般实验尽可能安排在每周3个学时内完成，指导老师应在实验前做好实验材料、仪器和试剂等的准备工作。有些实验难以在3个学时内完成，如胚胎标本制作(实验十七)、免疫组织化学(实验十八)、原位杂交技术(实验十九)和胚胎干细胞培养(实验二十)等实验都必须用几天的时间才能完成，这就需要合理安排实验时间。观察动物胚胎发育过程，如蛙的早期发育(实验八)、鸡的孵化(实验十)、鸡胚的壳外培养(实验十二)等，通常需要在晚上或第二天以后继续观察，将发生的变化详细记录下来，所以实验室有时必须向学生全天开放。实验室应建立必要的规章制度，学生应爱护实验室内的一切设备仪器，避免损坏和浪费；保持实验室整洁、安静、安全、文明。每次实验完毕，要将实验用具等放置到指定地点或指定状态，由值日生做好实验室清理卫生及水电等的安全检查工作。 希望学生学习了本实验课程后懂得在科学探索中怎样去做实验，怎样去分析实验结果。在实验过程中体会科学探索的辛劳，并从中获得初次探索的喜悦。 实验一 精子的发生 精子发生的全过程是在精巢(testis)内进行的。各种动物的精巢结构不同，精子的形态也各种各样，但精子发生的规律基本相似。精子发生都必须经历增殖期、生长期、成熟期和精子形成期这几个阶段。生精细胞包括精原细胞(spermatogonium)、初级精母细胞(primaG ryspermatocyte)、次级精母细胞(secondary spermatocyte)和精子细胞(spematid)。精母细胞经过一次复制和两次成熟分裂，形成单倍体的精子细胞，再经过变态形成精子(sperm)(图1.1)。 此外，在生精细胞之间还分布着一种称之为支持细胞(sertolicell)的体细胞，它对生精细胞具有支持、营养和分解残余物质的作用，也具有调节精子发生和诱导精子形成的作用。 精子的发生是一个连续过程。在哺乳动物精巢中有许多的生精小管，在生精小管上有规律地分布着各期生精细胞(图1.2、图1.3)。两栖动物或鱼类精子的发生有着明显的季节性变化。在精巢中有许多形态不规则的精小叶(seminiferouslobulus)，各期生精细胞以精小囊(spermatogeniccyst)为单位，分布在精小叶中(图1.4)。在同一个精小囊中的生精细胞往往为同一发育期的生精细胞，不同精小囊的生精细胞发育不同步。 一、实验目的 (1)通过观察哺乳动物、蛙类或鱼类的精巢切片，了解精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞的形态特征，了解精子的形成过程，比较不同动物精巢的结构特点。 (2)通过观察动物的活体精子和精子涂片，了解各种精子的形态和活动状况。 二、材料、仪器、试剂 (一)材 料 (1)小鼠的精巢切片(H.E.染色)、鱼或蛙的精巢切片(H.E.染色)、人的精子涂片(铁钒苏木精染色)。 (2)性成熟的雄性小鼠、蛙或鱼。 (二)仪器用具 普通显微镜、手术剪、镊子、培养皿、吸管、洁净的载玻片和盖玻片。 (三)药品试剂 哺乳动物的生理盐水(0.9%NaCl)，鱼或蛙的生理盐水(0.65%NaCl)。

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