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医学免疫学实验(第2版)

作者：胡四海，张艳

出版社：科学出版社出版时间：2022-01-01

开本：其他页数： 176

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版权信息
内容简介
目录
节选

医学免疫学实验(第2版) 版权信息

ISBN：9787030484857
条形码：9787030484857 ; 978-7-03-048485-7
装帧：一般胶版纸
册数：暂无
重量：暂无
所属分类：
医学
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医学免疫学实验(第2版) 内容简介

本书共包括“基本实验操作技术”、“基本性实验”、“综合性实验”和“研究创新性实验”共四篇，18章，53个实验。所选实验项目基本上是经过我们多年教学和科研实践证明的、切实可行的实验；编者是常年工作在教学和科研线、教学经验丰富、科研功底扎实的中青年骨干教师，保障了新版实验教材的内容与时俱进、方法优选实用。

医学免疫学实验(第2版) 目录

目录
**篇基本实验操作技术
**章血液标本的采集 1
实验一人血液标本的采集 1
实验二动物血液标本的采集 3
第二章免疫细胞分离与制备技术 7
实验三人外周血单个核细胞的分离 7
实验四 T、B淋巴细胞的分离 9
实验五 NK细胞的分离 12
实验六小鼠脾细胞的制备 14
实验七小鼠腹腔吞噬细胞的制备 15
实验八免疫磁珠法分离免疫细胞及亚群 19
第三章细胞计数及活性测定 22
实验九细胞计数方法 22
实验十细胞活力测定 24
第四章免疫原及佐剂的制备 26
实验十一颗粒性抗原的制备 26
实验十二可溶性抗原的制备 27
实验十三用半抗原制备免疫原 29
实验十四佐剂的制备 30
第二篇基本性实验
第五章凝集反应 33
实验十五直接凝集反应 33
实验十六间接凝集反应 39
第六章沉淀反应 43
实验十七凝胶内沉淀试验 43
实验十八免疫电泳技术 46
实验十九液相内沉淀试验 50
第七章补体参与的免疫反应 52
实验二十溶血试验 52
实验二十一补体活性测定 53
实验二十二补体依赖的细胞毒试验 55
第八章超敏反应试验 58
实验二十三 Ⅰ型超敏反应检测 58
实验二十四 Ⅱ型超敏反应检测 62
实验二十五 Ⅲ型超敏反应检测 65
实验二十六 Ⅳ型超敏反应检测 67
第三篇综合性实验
第九章免疫标记技术 69
实验二十七免疫酶测定法 69
实验二十八免疫荧光技术 72
实验二十九化学发光酶免疫测定 75
实验三十膜载体免疫测定 76
实验三十一间接ABC-ELISA法检测兔抗人Ig 79
第十章细胞免疫学实验 82
实验三十二 E花环形成试验 82
实验三十三 T淋巴细胞增殖试验 84
实验三十四白细胞移动抑制试验 89
实验三十五 CTL杀伤功能测定（51Cr释放法）91
实验三十六 NK细胞杀伤活性检测 93
实验三十七吞噬细胞吞噬杀菌作用及溶菌酶的溶菌作用 95
实验三十八白细胞介素-2的活性测定 101
实验三十九肿瘤坏死因子的生物学活性测定 105
第十一章体液免疫实验 107
实验四十抗血清（多克隆抗体）的制备 107
实验四十一 B淋巴细胞溶血空斑试验 112
第十二章细胞凋亡检测 115
实验四十二凋亡细胞的形态学检测 115
实验四十三凋亡细胞的生化特征检测 116
实验四十四凋亡细胞的流式细胞术检测 118
第四篇研究创新性实验
第十三章单克隆抗体的制备 122
实验四十五单克隆抗体的制备与鉴定 122
第十四章免疫印迹技术 133
实验四十六免疫印迹技术 133
第十五章 LAK细胞的制备 137
实验四十七 LAK细胞的制备和活性检测 137
第十六章 HLA分型技术 139
实验四十八 HLA的血清学分型法 139
实验四十九 HLA的细胞学分型法 141
实验五十 HLA的DNA分型法 144
实验五十一骨髓移植的HLA配型 147
第十七章树突状细胞的诱生与鉴定 149
实验五十二树突状细胞的诱生与鉴定 149
第十八章流式细胞术 151
实验五十三流式细胞术检测小鼠胸腺细胞表面CD4及CD8分子 151
参考文献 155
附录免疫学实验常用试剂及配制方法 156
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医学免疫学实验(第2版) 节选

**篇基本实验操作技术 **章血液标本的采集在免疫学实验中，常常需要采集人或实验动物的血液进行研究。正确采集血液标本是免疫学*基本的实验操作技术，也是获得准确、可靠实验结果的前提。血液采集技术和方法均要求保持血液标本的完整性和代表性，血液标本采集前，应根据实验目的选择合适的采血方法和合适的抗凝剂。本章主要介绍人和实验动物血液标本的采集。实验一人血液标本的采集【实验目的】掌握静脉采血法，熟悉皮肤采血法。【血液标本的类型】血液标本主要分为全血、血浆及血清等。 1. 全血保留血液的全部成分，由血细胞和血浆组成。血液经抗凝处理后的全部血液称为抗凝全血，常用于免疫细胞的分离和血细胞的检查等。 2. 血浆全血抗凝之后经离心除去血细胞后的成分，为淡黄色液体，用于血浆生理性和病理性化学成分的测定。血浆除因子Ⅳ外，含有其他全部凝血因子，特别适合于血栓与止血的检查。 3. 血清血液离体后不经抗凝处理、自然凝固后析出的液体部分，除纤维蛋白原等凝血因子在凝血时被消耗外，其他成分与血浆基本相同，更适用于多数临床化学和临床免疫学检查。 4. 分离或浓集的细胞成分有些临床实验特别是近年来新出现的一些医学检验项目，要求采集特定的细胞成分，如相对浓集的粒细胞、纯化的淋巴细胞、分离的单个核细胞、富集的血小板、浓集的白血病细胞等。【实验器材】真空采血管（普通血清管、枸橼酸钠或肝素抗凝管）、一次性使用静脉采血针、止血带、一次性专用采血针、络合碘、无菌干棉签、无菌干棉球等。【实验方法】血液标本的采集分为静脉采血法、皮肤毛细血管采血法和动脉采血法。动脉采血法因其风险性较高，在临床上一般很少使用。 1. 静脉采血法当检查项目使用血量较多时通常采用静脉采血法（venipuncture for blood collection）。静脉血能准确反映全身血液的真实情况，且不易受气温和末梢循环的干扰，更具代表性。位于体表的浅静脉均可作为采血部位，通常采用肘部静脉。如果肘部静脉不明显，还可用手背静脉或内踝部静脉。婴幼儿由于肘部静脉较细和配合性差，可从股静脉或颈外静脉采血，但要准备充分，注意其风险性。负压采血法：又称封闭式采血法（tube for blood collection），是近年来在传统的静脉采血法基础上进一步发展和完善的一种新的、简便易行的静脉采血法。其原理是封闭的试管内有定量的负压，使血液定量进入试管内（图1-1-1，图1-1-2，见文后彩图1，彩图2）。图1-1-1 负压采血法器具图1-1-2 负压采血法常选择肘正中静脉或贵要静脉处采集静脉血，在穿刺点上方约6cm处系止血带，消毒，嘱被采血者握拳使静脉充盈。将一次性采血针一头胶套取下，以15°～30°角度刺入血管，见回血后，固定针柄；将双向采血针另一端针头刺入真空采血管的管盖，使血液顺着压力差流入真空采血管内。待血液停止流动后，固定针头不动，取下该真空采血管，将其余备好的真空采血管依次推入、取出，完毕松止血带，*后拔出穿刺针，用无菌干棉签按压针眼处片刻以止血。负压采血法的优点如下所述。（1）血样无容器之间的转移，减少了溶血现象而有效保护了血液有形成分。（2）减少了二次污染机会，保证待检血液标本原始性状的完整性，使检验结果更为真实。（3）如果使用血量或检查项目较多时，只要更换封闭的负压试管就可连续采血。（4）采集的血液标本转运方便，特别适用于病房和野外流动采血，能避免对医护人员的感染和患者血液标本间的交叉污染。 2. 皮肤毛细血管采血法（skin puncture for blood collection）皮肤毛细血管采血法主要用于需血量微小的检查项目，所得到的末梢血不单纯是毛细血管血，实际是微动脉、微静脉和毛细血管的混合血，并依采血时挤压的力度不同含有少量细胞间质和细胞内液。采血部位：成人常用手指或耳垂采血。耳垂采血痛感较轻，操作方便，但血循环较差，受气温影响较大，检查结果不够恒定，现在不提倡使用。手指采血操作方便，可获相对较多血量，检查结果也比较恒定。世界卫生组织（WHO）曾推荐必要时可用左手环指指端内侧血做血液一般检验。婴幼儿因手指太小可用脚大趾或足跟部位采血。严重烧伤患者，应选择皮肤完整处采血。采血器：采用特制三棱针或专用“采血针”，特别是后者有利于采血技术的质量控制，严禁用注射针头代替采血针。为避免交叉感染，必须严格实行一人一针一管（毛细吸管）。采血方法：轻轻按摩采血部位，使局部组织自然充血，消毒皮肤。干燥后，紧捏采血部位两侧，右手持一次性消毒采血针迅速刺入，深度以2～3mm 为宜，稍加挤压血液自动流出。第1滴血液因混入组织液相对较多，常弃去不用。用微量吸管吸取血液至所要求的刻度，然后用无菌干棉球压住针刺点以止血。【注意事项】（1）采血前患者应保持平静，一般应在清晨时间空腹取血。（2）静脉采血时，止血带压迫时间应小于1min。压迫时间过长（超过2min），大静脉血流受阻而使毛细血管内压上升，可能会使血管内液与组织液交流，致使分子量小于5KDa的物质溢入组织液；而且随着压迫时间延长，局部组织可能发生缺氧而引起血液成分的变化增大。（3）负压采血时，若遇到血液不能顺畅地流入真空管，可能是因为真空管的真空度不够，更换真空管即可解决这一问题。（4）如遇患者采血后发生晕厥，可让其迅速平卧休息片刻，一般可很快恢复。必要时可嗅芳香氨酊，针刺或指掐人中、合谷等穴位。（5）皮肤采血应避开有炎症、化脓、冻伤等皮肤损害部位。皮肤出汗应先用干棉球擦干，以免稀释血液。采血时切忌用力挤压，以免混入组织液，影响检验结果。（6）采集血浆或血清标本时要注意防止溶血。注射器和容器必须保持干燥，静脉采血完毕应先拔针头，然后将血液徐徐注入标本容器，避免冲击力过大而致溶血。发生溶血的主要原因有容器不清洁、接触水或化学溶剂、强力振荡和分离血细胞时操作不慎等。一旦由于某种原因发生了溶血，应重新采血，不能勉强和凑合使用，以免影响检验结果。【思考题】 1. 负压采血法的主要优点有哪些？ 2. 静脉采血法和皮肤毛细血管采血法各适合于什么情况？实验二动物血液标本的采集动物经免疫3～5次后，可取血测定抗体效价，若鉴定合格，应在末次免疫后5～7d及时采血；若抗体效价不理想，可追加免疫1～2次后再行采血。【实验目的】熟悉免疫学试验中常用动物的血液采集方法。常用实验动物：小鼠、大鼠、家兔和犬。【实验器材】 1. 器材兔箱、兔固定台、犬固定台、鼠固定板、剪刀、手术刀、注射器、玻璃毛细管、血色素吸管、止血带等。 2. 试剂 1%肝素生理盐水溶液、饱和草酸钾溶液、3.8%的枸橼酸钠溶液、生理盐水。【实验方法】实验动物的采血方法较多，按采血部位不同可分为穿刺采血法（含剪、割法）、断头采血法、心脏采血法、颈动（静）脉采血法、腹主动脉采血法、股动脉采血法、耳静脉采血法、尾静脉采血法等。 1. 大鼠与小鼠的采血方法（1）尾静脉采血法：适用于所需采血量很少时。固定动物并露出鼠尾，将尾部浸入45～50℃温水中数分钟，使尾静脉充血，擦干，再用酒精棉球消毒。剪掉尾尖（0.2～0.3cm），拭去**滴血。然后用血色素吸管定量吸取尾血。采血完毕用干棉球压迫止血。亦可不剪尾，用7～8号注射针头连上注射器直接刺入尾静脉采血（图1-1-3）。若反复采血，可由鼠尾远心端向近心端逐步穿刺（或剪断尾部）。（2）眼眶静脉丛采血法：当需血量中等而又要避免动物死亡时采用。左手拇指及示指紧紧握住大鼠或小鼠颈部，压迫颈部两侧使眶后静脉丛充血，但用力要恰当，防止动物窒息死亡。右手持7号针头（连接1ml的注射器）或者玻璃毛细管，从右（左）眼内眦部以45°角刺入（图1-1-4）。大鼠刺入深度为4～5mm，小鼠为2～3mm，当刺入后感到有阻力时停止推进，同时退针0.1～0.5mm，边抽边退。采完后拨出针头或毛细管，同时除去加于颈部的压力，用干棉球压迫止血。小鼠一次可采血0.2～0.3ml，大鼠一次可采血0.5～1ml。图1-1-3 鼠尾静脉采血图1-1-4 鼠眼眶静脉丛采血（3）断头采血法：当需血量较大而又不需继续保存动物生命时采用。该法是用利器（术剪或刀片）断离头颈部一次性采血，适用于大鼠和小鼠。采血时操作者左手拇、示指握住鼠颈部，头部朝下，用利剪在鼠颈头间1/2处剪断，让血液自由滴入容器中，小鼠可采血1ml左右，大鼠可采血10ml左右。断头采血法所获血液中混有少量组织液，有时还混有断毛，极易被污染，故采血时应注意防止污染。 2. 家兔采血方法（1）耳缘静脉采血法：为*常用的取血方法之一，可多次反复取血。将家兔固定于兔箱中，选静脉较粗而清晰处，拔掉拟采血耳缘部细毛，用手指轻弹兔耳或电灯照射兔耳，使耳部血管充分充盈，然后消毒，用5号半针头沿耳缘静脉远端（末梢端）刺入血管（静脉采血时应逆血流方向进针），取血后酒精棉球压迫止血，此法一般可采血5～10ml。也可左手压迫耳根，用针头刺破静脉或以刀片在血管上切一小口，让血液自然流出。采取抗凝血时应在耳缘切口处涂20%枸橼酸纳液，采血完毕用干棉球压迫止血。（2）颈动脉采血法：常用的取血方法之一，适用于家兔、绵羊和山羊等。以家兔为例，在家兔颈外侧做皮肤切口，分离颈总动脉，插入动脉插管，将血液引入无菌的玻璃器皿。放血不宜过快，否则易致动物死亡，故应在放血总量近一半时，将动脉夹住片刻后再继续放血，这样获得的血量可明显增多，颈动脉采血一般可获血50ml，*多可获70～80ml。（3）耳动脉采血法：耳部采血也可选耳中央动脉，兔耳中央有一条或两条较粗、颜色较鲜红的动脉，刺入方向应朝近心端（图1-1-5，彩图3）。由于兔耳中央动脉在受刺激时有痉挛反应，因此刺入血管后稍等片刻或在痉挛前迅速抽血。取血针头应稍大一些，一般用6号针头。耳动脉采血部位应从中央动脉末端开始，不要在近耳根部进针，因近耳根部组织较厚，血管不清晰。（4）心脏穿刺采血法：多用于家兔、豚鼠、大鼠和鸡等动物的采血（小动物因心脏搏动很快、心腔小、位置较难固定而较少使用）。将家兔仰卧位固定在兔台上或由助手捉持，在左胸第2～4肋部剪毛，常规消毒。采血时，先用指尖于第3～4肋胸骨左缘探明心脏搏动*明显之处进针，针头宜长些（采用6号针头）（图1-1-6，彩图4）。刺入胸腔后，仔细感觉针尖随心脏搏动在动，如将注射器抽成负压，血液可自动流入注射器。采血完毕迅速将针头拔出，这样心肌上的穿刺孔较易闭合，针眼处用酒精棉球压迫止血。1只家兔一次可采血20～30ml。心脏采血时动作应迅速，缩短留针时间以防止血液凝固，若针头已刺入心腔但又抽不出血时，应将针头稍微轴向转动一下或稍后退一点，切不可使针头在心脏内横向摆动。图1-1-5 耳缘静脉采血图1-1-6 心脏采血（5）股动脉采血法：将家兔仰卧于实验台上，伸展后肢固定，暴露出腹股沟三角动脉搏动部位，剪毛，消毒，使用5号半针头的注射器，以血管搏动为指标，将针头直接刺入血管内。若已刺入动脉血管，即有鲜红色血液流入注射器。抽血完毕迅速拔出针头，用干棉球压迫止血几分钟。 3. 犬的采血方法（1）后肢外侧小隐静脉和前肢皮下头静脉采血：本法*常用，且方便。抽血前，将犬固定在犬固定台上或使犬侧卧，剪去抽血部位的毛，常规消毒，一人用力压迫静脉近心端或用

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